[01282738]具有减肥和辅助降血脂双重功能的CFTs保健食品研发

本课题研究表明：CFTs具有安全、有效、质量可控以及作用机制相对明确特点。可以将开发成为具有减肥和辅助降血脂双重功能保健食品,也有潜力将其开发成治疗肥胖症和高脂血症的天然药物（中药）5类新药。1)完成了制备CFTs配方和工艺研究COST是淡黄色粉末,易飞扬,且湿热敏感,不适合用粉末直接压片法制备,故采用湿法制粒压片、薄膜包衣技术制备。探索了片心和包衣液配方,考察了制备工艺,获得最佳制备条件,进行了千粒级放大试验,得到合格CFTs样品。2)建立质量标准,完成了稳定性研究根据国家天然药物新药注册技术要求和《中国药典》2015年版标准,进行了通则项目检查,结果表明：CFTs外观整洁,形态完好,性质稳定。CFTs装量差异限度、崩解时限、溶出度均符合《中国药典》要求;采用苯酚-硫酸法测定有效成分含量,产品符合要求。首次建立了利用紫外一阶导数分光光度法和溴甲酚绿酸碱滴定法准确测定壳寡糖脱乙酰度方法。通过加速稳定性试验确定产品有效期为2年。3)完成了其减肥功能评价及其机制研究根据《保健食品检验与评价技术规范》中减肥功能评价相关技术要求,对CFTs进行了减肥功能评价。动物实验表明：在不影响食欲前提下,CFTs能显著降低HFD诱导SD肥胖大鼠的体重增重,减少大鼠体内的总脂肪含量,其高、中剂量的效果与orlistat相当,具有良好减肥作用。采用FQRT-PCR检测大鼠睾周脂肪内FTO、LXRα、c/EBPβ、PPARγ、TLE3 mRNA的表达和棕色脂肪组织中FTO、UCP1、PRDM16、DIO2等基因表达情况,初步探讨了CFTs减肥作用的分子机制。结果表明：CFTs对睾周脂肪内的FTO有抑制作用,可通过抑制睾周脂肪内的LXRα、c/EBPβ、PPARγ、TLE3 mRNA表达,调节脂质代谢、存储和运输,减少脂质积累和脂肪组织分化,发挥其减肥活性。另外,CFTs还能够通过激活棕色脂肪组织中UCP1的调控因子PRDM16、DIO2表达继而上调UCP1表达,促进产热,增强代谢,达到减肥目的。4)完成了其辅助降血脂功能评价及其机制研究根据《保健食品检验与评价技术规范》中辅助降血脂功能评价相关技术要求,对CFTs进行辅助降血脂功能评价。结果表明：CFTs各给药组可有效地改善大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C含量,升高大鼠粪便中TC、TG、TBA含量,并可有效地改善大鼠肝脏中AST、ALT酶活力,具有一定缓解肝功能损害的作用;而且,可降低大鼠体重增重量、大鼠肝脏指数、大鼠心脏指数和脂/体比,有效缓解HLP大鼠脂质紊乱现象,其降血脂效果与Atorvastatin相当。通过FQRT-PCR法以及Western-blotting法测定各组大鼠肝脏内CYP7A1、LXRα、LDLR、SREBP2、HMGCR、PPARα mRNA以及蛋白表达情况,初步探讨了CFTs缓解HLP大鼠的高脂血症分子机制。结果表明：高脂饮食诱导HLP大鼠模型可使其肝脏CYP7A1、LXRα、LDLR、PPARα mRNA和蛋白表达都显著降低,SREBP2、HMGCR mRNA和蛋白表达都显著升高;而CFTs给药后可逆转这现象,增加肝脏CYP7A1、LXRA、LDLR、PPARα mRNA和蛋白表达及降低SREBP2、HMGCR mRNA以及蛋白的表达。CFTs的降血脂机制可能是通过促进肝脏CYP7A1 mRNA和蛋白表达,抑制HMGCR mRNA和蛋白表达,进而抑制胆固醇合成和促进胆固醇排泄,实现调脂作用。5)CFTs安全性毒理学评价试验根据《保健食品检验与评价技术规范》,COST属于允许用于保健食品的动植物或动植物提取物或微生物的原料,应进行急性毒性试验、三项致突变试验和30天喂养试验。急毒实验表明：与对照组比较,样品组灌胃后小鼠未见明显差异,实验连续观察14天,小鼠全身状况、摄食、饮水、体重增长均正常。小鼠口服壳寡糖样品LD50＞27g/kg,每日最大用量为54g/kg/d。壳寡糖样品临床用量为3g/日/人,成人体重以60kg计,平均用量为0.05g/kg/d。按体重计：小鼠（平均体重以20g计）口服壳寡糖样品的耐受量为临床用量的1080倍,提示该样品安全无毒。亚急性毒性实验表明：与对照组比较,灌胃后样品组小鼠未见明显差异,实验连续观察30天,未出现因灌服样品出现中毒或死亡情况;试验鼠的精神状况正常,采食、饮水情况良好,血液常规分析和血液生化指标检测正常;剖检及高剂量组病理组织学检查轮廓清晰,结构完整,未发现任何病理变化。三项致突变试验表明：样品对小鼠没有毒性,小鼠灌胃微核、精子畸变等致突变试验均为阴性,表明在给药剂量小于和等于10000mg/kg的情况下,样品不具有体内染色体损伤作用;同时,对雄性生殖细胞没有遗传毒性,无致突变作用。