[00888419]口蹄疫疫苗无血清悬浮培养BHK21细胞生产工艺技术研究与应用

项目属于畜牧兽医科学预防兽医学应用研究领域。 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的牛、猪等偶蹄动物烈性接触性传染病，因发病率高、传播速度快和危害大而被世界动物卫生组织列为动物A类传染病，接种疫苗是预防最有效手段。传统口蹄疫疫苗采用转瓶贴壁培养BHK21细胞的方式生产，因手工操作多、易污染、批量和质量受限，且生产中必须使用动物血清而增加了潜在的生物安全风险，迫切需要工艺升级。 该成果立足中国口蹄疫疫苗行业生产工艺升级的迫切需求，以提高口蹄疫疫苗整体技术水平为目标，联合了新疆天康、中牧股份兰州和保山生物药厂、兰州百灵等口蹄疫疫苗等专业技术单位共同组建技术攻关团队，历时8年建立了动物细胞生物反应器悬浮培养技术研究和成果转化平台，完成了口蹄疫疫苗无血清悬浮培养BHK21细胞生产工艺技术开发并转化生产，工艺“技术先进、成熟度高，效益显著。整体水平达到了国内领先水平，无血清悬浮细胞培养技术达到国际领先水平”。 该成果引进BHK21细胞应用细胞驯化技术，将贴壁型BHK21细胞驯化为无血清全悬浮培养型细胞，经单细胞克隆技术和筛选得到优势克隆株培养密度达1.0×10⁷/mL以上，取得了中国典型培养物保藏中心保藏号C2016147和C2016148，研制了BHK21细胞个性化无血清培养基。悬浮培养型细胞可高效增殖口蹄疫O型、A型和AsiaⅠ型的多种毒株，病毒培养液146s可达5μg/mL，比传统转瓶培养抗原含量提高了10倍。建立了从复苏→3000L反应器悬浮培养逐级放大方法，优化了反应器培养口蹄疫疫苗的技术参数，于2013年国内第一个研发了生物反应器无血清悬浮培养工艺的口蹄疫疫苗-口蹄疫O型、亚洲1型二价灭活疫苗(兽药生字[2013]310017061)。 成果已授权4项发明专利，技术转化至新疆天康和中牧股份的口蹄疫疫苗生产企业，共获得15个新兽药证书，已全部替了换传统工艺，企业年产口蹄疫疫苗超过10.6亿头份，占中国50％市场份额。2015-2017年转化企业累计利润为97397.9万元，税收12730.19万元。同时，研究团队获得教育部创新团队和全国高校黄大年式教师团队等称号，产生了较好的经济效益和社会效益。