[00874896]动物组织中猪瘟病毒和伪狂犬病病毒荧光定量PCR检测技术
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技术详细介绍
该项目是国家“十五”重大科技专项“食品安全关键技术”课题的子课题。
采用数据库序列搜索和同源性分析，选取相应的靶序列，设计出PCR引物和探针，经实验优化、验证和重复实验，建立了猪瘟病毒和伪狂犬病毒荧光定量的PCR检测技术，进行了方法的特异性、敏感性和重复性实验评价。该方法定量检测的线性范围为101-108拷贝病毒核酸分子，最小检测限为10拷贝。与传统病毒检测方法对比研究证实，荧光定量PCR检测技术比传统的病毒分离和生物学试验、电镜观察、免疫荧光技术、补体结合试验、核酸杂交和聚丙烯酰胺凝胶电泳等检测方法的灵敏度提高了2至3个数量级，重复性检测的变异系数CV小于5％。荧光定量PCR检测技术具有耗时短、步骤简单、高通量和定量检测病毒等特点，适用于动物组织中猪瘟病毒和伪狂犬病毒的快速定量检测，实现病毒检测技术的定量化、标准化和科学化。该检测技术已获得国家发明专利1项，申报国家发明专利1项。