[00759746]建立和应用肿瘤转移相关基因生物芯片筛选肿瘤转移药物

该项目的主要研究成果如下：(1)制备成乳腺癌转移相关基因基因芯片：在建立高转移倾向乳腺癌细胞系LM-MCF-7(为MCF-7细胞的亚克隆)的基础上，与MCF-7细胞相比较，应用基因芯片技术筛选了与乳腺癌转移相关的基因。结合文献报道的乳腺癌转移相关基因，通过生物信息学手段，自行设计了218个乳腺癌转移相关基因分子探针，进行寡核苷酸探针合成，制备成乳腺癌转移相关基因基因芯片。建立了一套用于筛选抗乳腺癌转移药物的技术平台，包括细胞水平、基因芯片筛选和动物水平等，综合评价所筛选的药物。(2)肿瘤药物筛选的初步研究：选择了阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、小檗胺(EBB)、足叶乙甙(VP-16)、盐酸平阳霉素(PYM)、异环磷酸胺(Ifo)和盐酸平阳霉素(PYM)等6种抗癌药物作用于LM-MCF-7细胞系，应用细胞活力测定、细胞划痕实验以及流式细胞仪等技术手段分别检测了上述药物对LM-MCF-7细胞增殖、迁移能力和细胞周期等影响。结果显示，上述6种抗肿瘤药物对LM-MCF-7细胞的增殖、迁移均有显著的抑制作用。应用上述6种抗癌药物作用LM-MCF-7细胞后在制备的基因芯片进行检测。结果显示，在212个肿瘤转移相关基因中阿霉素上调ERCC1基因的表达而下调FAK基因的表达；小檗胺只对FAK基因有下调作用；足叶乙甙可上调ERCC1和DRAK2基因表达，下调HRAS、IGFBP-5、STK15和AA26221基因表达；异环磷酰胺可上调ERCC1和SQRDL基因的表达；DDP对基因的影响最为显著，可上调ERCC1基因表达，下调PIK3C2B、PGK1、RAF1、AA262211、W30988、nck、STK15和H59973基因表达。采用SCID鼠接种LM-MCF-7后，应用DDP腹腔注射SCID鼠进行治疗，初步结果显示乳腺癌转移相关基因基因芯片。(3)获得国家发明专利2项，申请国家发明专利9项，发表论文10篇，参加国际学术会议3次大会发言，并获得大会优秀论文。该成果的主要创新点：(1)制备了含有218个基因的“乳腺癌转移相关基因基因芯片”，已申请国家发明专利。该基因芯片可用于抗乳腺癌转移药物的筛选、乳腺癌转移早期诊断和指导个体化治疗等。(2)建立了应用乳腺癌转移相关基因基因芯片的一套技术平台，并初步筛选出顺铂、足叶乙甙和异环磷酰胺具有抑制乳腺癌转移的作用。该研究成果具有很好的社会效益，并可产生很好的经济效益。应用该研究室建立的SCID小鼠肿瘤转移动物模型，采用DDRT-PCR技术，筛选肿瘤转移相关基因，构建肿瘤转移相关基因的cDNA文库，以此建立肿瘤转移相关基因的生物芯片，建立用于筛选抗肿瘤转移药物的技术平台，筛选出具有抗肿瘤转移特性的药物。该研究具有重要的理论意义和实际应用价值：应用基因生物芯片技术作为检测手段，能够较为精确的反应出药物对于肿瘤细胞转移相关基因表达的影响，可筛选出抗肿瘤转移特性的药物和化合物，有助于攻克肿瘤治疗中的难点，提高肿瘤患者的治疗效果；通过建立肿瘤转移相关基因的生物芯片，筛选出具有抗肿瘤转移特性的药物，是临床治疗肿瘤的迫切需要，必然具有广阔的市场前景和巨大的经济效益；同时，新的用于筛选抗肿瘤转移药物技术平台的建立可带动在抗肿瘤转移药物的开发和应用，具有产业链发展的潜在作用，必将带来良好的经济效益和社会效益。