[00719785]染料木素原料药及其胶囊制剂

染料木素原料药及其制剂的主要研究结论：　1、染料木素的主要药效学试验结论：①染料木素可抑制去势模型大鼠的体重增加，增加维甲酸模型大鼠的体重，并明显增加维甲酸大鼠的左股骨重量、左胫左胫骨重量和（P＜0.05或P＜0.01）。②模型大鼠的血清Ca、P、Mg、CT水平明显降低，BGP、ALP水平升高，与正常对照组有显著差异（P＜0.05或P＜0.01）；4.5mg/kg、9mg/kg染料木素治疗后，上述各指标均显著改善，与模型组比较相差显著(P＜0.05或P＜0.01)。③4.5mg/kg、9mg/kg 染料木素可显著改善模型大鼠股骨最大载荷、最大桡度、弹性载荷、弹性桡度；其作用明显优于骨疏康（阳性对照药）。④4.5mg/kg、9mg/kg染料木素可明显增强模型大鼠的股骨、胫骨和腰椎L2-4的骨密度（P＜0.05或P＜0.01）。⑤4.5mg/kg、9mg/kg 染料木素可明显升高维甲酸和去势模型大鼠血清中微量元素含量（P＜0.05或P＜0.01）。⑥4.5mg/kg、9mg/kg 染料木素可明显增加模型大鼠的骨小梁面积百分比（BV/TV％）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁数目(Tb.N)，降低骨小梁间隔(Tb.Sp)。⑦13mg/kg、26mg/kg 染料木素具有显著抗炎和镇痛作用（P＜0.05或P＜0.01）。⑧对小鼠单核巨噬系统有明显抑制作用（P＜0.01）。⑨拟推荐临床用药采用口服法；成人日用剂量为50.4～100.8mg [计算方法： 4.5mg/kg（9.0/中剂量）用药剂量×（200/1000）kg大鼠体重×56体重指数=50.4（100.8）mg]。⑩推荐用药3个月为一疗程。2、染料木素一般药理研究的试验结论：染料木素给药后对小鼠自主活动次数，大鼠的呼吸频率，ECG（心电图），BP（血压）变化不明显；故染料木素对神经系统，呼吸系统，心血管系统无明显影响，提示临床用药具有安全性。3、染料木素的小鼠急性毒性试验结论：按最大耐受量(MTD)测定法，给30只小鼠一日内分两次(间隔6h)灌胃染料木素 24g/kg，观察一周无动物死亡，表明该试药MTD＞24g/kg，该剂量是临床成人用药剂量的21818倍[24g/kg×1000mg÷1.1mg/kg（平均76mg÷70kg体重）成人日用剂量]。4、染料木素大鼠长期毒性实验结论：8、160和320mg/kg（相当于临床成人拟用剂量7、146、291倍）染料木素连续灌胃给药6个月，对动物的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、甲状腺、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢、胃、十二指肠、回肠、结肠、胰腺、膀胱、淋巴结、脑、脊髓、胸骨（骨和骨髓）、股骨、腰（胸）椎骨、视神经及垂体等脏器，经病理组织学检查，未见由药物所致的病理性改变。　5、染料木素 Beagle犬长期毒性试验结论：试验结果表明，Beagle犬连续口服6mg/kg，250 mg/kg，500mg/kg（相当于临床成人拟用剂量的6、227、455倍）染料木素36周，对Beagle犬的生长、发育、饮食、精神状态、 大小便无明显影响。对消化道、血液常规指标及肝、肾功能无明显毒性。对心、肝、脾、肺、肾等主要脏器无损害。6、染料木素致突变试验结论：染料木素诱发鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍。根据《中药新药研究指南》结果评定标准，受检样品—染料木素的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验结果为阴性。染料木素小鼠骨髓微核试验，试验溶剂对照雌、雄性小鼠的微核率分别为5.0‰、3.0‰；阳性对照雌、雄性小鼠的微核率分别为65.8‰、64.8‰，符合试验方法的要求。受检样品—染料木素各剂量组的微核率与溶剂对照组进行统计学处理，未见有显著性差异。根据《中药新药研究指南》结果评定标准，受检样品染料木素的小鼠骨髓微核试验结果为阴性。7、染料木素致畸变试验结论：染料木素小鼠睾丸精原细胞染色体畸变试验，该试验溶剂对照和阳性对照组的染色体畸变率分别为1.0％和2.8％，两组的染色体畸变率用X<'2>检验进行统计学处理，有显著性差异（P＜0.05），符合试验方法的要求。受检样品各剂量组的染色体畸变率为0.8％～1.2％，与溶剂对照组的染色体畸变率用X<'2>检验进行统计学处理，均未见有显著性差异。根据《中药新药研究指南》结果评定标准判定，受检样品染料木素的小鼠睾丸精原细胞染色体畸变试验结果为阴性。8、染料木素生殖毒理试验结论：染料木素的一般生殖毒性试验，雌、雄性大鼠试验组给予受检样品染料木素剂量分别为：16、160、480mg/kg/ bw；溶剂对照给予0.5ml/kg/bw蒸馏水。雄性大鼠连续给药60天后与给药14天的雌性大鼠合笼，雄性大鼠给药至交配结束，雌性大鼠给药至妊娠第17天。各组孕鼠1/2于妊娠第14天剖检，另1/2孕鼠使其自然分娩哺乳；仔鼠于第28、35天分别处死1/2剖检，观察有无畸形。试验结果表明：受检样品染料木素480mg/kg /bw剂量引起亲代雄性大鼠精子活动度下降，但未发现睾丸病变，也未影响雄鼠生殖能力；同时使雌鼠妊娠期体重增长明显低于其他组，但未影响胚胎形成、仔鼠的生长发育。160mg /kg/bw剂量对亲代和仔代未引起明显的异常。因此，根据该试验结果认为受检样品染料木素对大鼠不具有一般生殖毒性。9、染料木素药代动力学结论：大鼠灌胃(ig)给予6.25、12.5和50mg/kg的染料木素（分别为人推荐用量的2.5、5、20倍），发现染料木素ig后能迅速吸收入血，血浆药物浓度-时间曲线呈明显的双峰，说明该药在大鼠体内存在肝肠循环。药-时数据经药代动力学软件分析，体内过程符合一室模型，平均消除t1/2Ke为7.634h，50 mg/kg呈现异常动力学过程。与大鼠尾静脉注射9mg/kg染料木素的AUC相比，该药胶囊剂ig 给药的绝对生物利用度为66.28％（0--T）[56.50％（0--∞）]。大鼠ig给予12.5 mg/kg染料木素，测定不同时间原型药物的组织分布，发现除胃肠组织外，其他组织在给药后80min药物分布达最高，其中以肝脏、肾、子宫和卵巢组织分布较多，以后随时间延长而逐渐降低，在同一时间以胃肠组织药物含量最高。染料木素吸收入血后，迅速与葡萄糖醛酸结合，大鼠ig给予9mg/kg染料木素，部分药物以原型及葡糖醛酸结合型经尿及粪便排出体外。24h内药物经尿的排谢率为9.63％（原型及葡萄糖醛酸结合型药物），经粪便的排谢率为20.06％（原型及葡萄糖醛酸结合型药物）。10、染料木素制备工艺研究结论：采用回流提取-沉淀-结晶-水洗-精制等工艺，从植物中提取和纯化出染料木素；实验室收率达到0.636％，HPLC测定纯度（归一化法）大于98％，HPLC测定XXX甙纯度（归一化法）达到95％以上。应用核磁、紫外、质谱、红外等进行结构鉴定，确证回流提取的中间体为XXX甙，经过水洗-回流脱脂-酸解等处理获得的终产品为染料木素。染料木素的中试生产平均收率为0.54±0.10％，0.636％，HPLC测定纯度平均为99.93±0.01％（n=3），百分含量为98.84±0.18％(n=3)，而UV法测定百分含量为99.41±1.99％(n=3)，达到了单体纯度大于98％的要求。中间体XXX甙的HPLC分析显示，平均纯度达97.81±0.09％(n=3)，百分含量为97.11±0.7％(n=3)。UV法测定百分含量为93.42±0.66％。该提取工艺简单、易行，稳定，收率高。11、染料木素理化性质研究结论：对三批实验室研究和三批中试生产提取和纯化的染料木素进行了红外吸收光谱（IR）、紫外吸收光谱（UV）、核磁共振（1HNMR、 13CNMR）、质谱（MS）、X衍射（XRD）和热分析（差热分析、热重分析），经对比分析和综合论证，确认六份样品为同一种化合物，其化学名称为5,7,4’-三羟基异黄酮，与标准品（Sigema公司出品）和文献报道的染料木素化学结构完全一致。12、染料木素临床用质量标准和稳定性试验研究结论：按照药典（2000年版一部）的有关规定，对染料木素原料药及其胶囊制剂进行了质量标准和稳定性研究。结果表明：按照回流提取-沉淀-结晶-水洗-精制等工艺提纯的染料木素原料药及其胶囊制剂质量可控，产品于自然条件下存放，其结构和化学性质稳定。技术水平：已申请国家专利，具有自主知识产权。成熟程度：已上报国家SDA申请临床研究。1、按照国家药品监督管理局（SDA）一类新药申报程序和规定，该校和西安恒泰本草科技有限公司商定，于2002年5月14日正式向解放军总后卫生部药品监督办公室提出“一类中药新药染料木素原料药及其胶囊制剂的研究现场与原始资料审查的申请报告”。总后卫生部药品监督办公室及时派出专家团对该校的及该新药的研究现场和原始资料进行了认真、客观和严格的考察。其考评结论为“该项目研究的现场和原始资料真实、科学、可信，原始记录规范，且基本符合SDA的有关规定。”2、染料木素原料药及其胶囊制剂按照SDA申请一类中药新药的要求，于2002年8月向中国药品生物制品鉴定所递交有关“染料木素原料及其制剂染料木素胶囊临床研究用质量标准”复核的申请。经复核证实，该品检验结果符合染料木素原料及其胶囊制剂临床用质量标准。并于2002年10月24日发出鉴定复核合格报告书。该原料药和胶囊制剂已于2002年11月28日正式上报SDA申请临床试验研究（已正式受理）。推广的主要技术内容：合作方式：转让临床批件。