[01749055]乳腺杂交瘤细胞系的建立

该项目分别进行了小鼠、奶牛、牦牛乳腺细胞的体外培养，通过核型分析、络蛋白和乳腺细胞特异性骨架蛋白--角蛋白表达的检测，以及外源性基因的表达等研究，确定将牦牛乳腺上皮细胞作为杂交瘤细胞的亲本细胞。采用化学诱导的方法，选择不同分子量的PEG作为诱导剂，成功实现了牦牛乳腺细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0的融合，确定了PEG的分子量为6000，浓度为50%，作用时间为50s为最佳融合条件；同时，采用融合技术实现了牦牛乳腺细胞与小鼠骨髓瘤细胞的融合，确定了AC强度为100V/cm，AC持续时间为30s，DC强度为1700V/cm，DC持续时间为15μs,2次脉冲的最佳电融合条件和参数。分别采用选择性培养法和细胞克隆法分离筛选乳腺杂交瘤细胞，使用HAT选择培养基经10天左右时间培养除去小鼠骨髓瘤细胞，再用软琼脂培养基法经两周左右时间除去牦牛乳腺上皮细胞，得到能够继续传代的牦牛乳腺杂交瘤细胞；将阳性融合细胞进行标记培养，7d左右出现典型的细胞克隆，将阳性克隆细胞扩大培养，得到纯化的乳腺杂交瘤细胞。获得的乳腺杂交瘤细胞可在牦牛乳腺细胞体外培养体系中传代并具备蛋白质合成和分泌功能。