[01396670]Ni^（2+）亲和胶的制备及其对带His6标签融合蛋白的纯化
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技术详细介绍
目的：制备Ni^（2+）亲和胶,并检测其纯化带His6标签融合蛋白的效果。 方法：在强碱条件下,用环氧氯丙烷活化Sepharose4B后,接上多个IDA臂,将Ni^（2+）连接在IDA臂上,即为亲和胶成品。用亲和胶分别在变性和非变性的条件下,纯化包涵体和可溶性表达的带His6标签的人TRF1和人tankyrase的PARP结构域,并通过Western印迹鉴定纯化的靶蛋白。 结果：用自制的Ni^（2+）亲和胶可以获得SDS-PAGE单一条带的目的蛋白,并得到Western印迹的鉴定。 结论：自制的Ni^（2+）亲和胶对带His6标签融合蛋白的纯化能力与商品胶完全等同,但价格低廉。