[01379716]基于加速溶剂萃取技术结合多维色谱-质谱联用法的羌活化合物组及代谢物组研究（重点）

羌活,来源于伞形科植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang或宽叶羌活Notopterygium forbesii Bpiss.的干燥根茎及根,始载于《神农本草经》,有 2000 多年的药用历史,为中医临床常用中药之一,主要用于外感风寒、头痛无汗、寒湿痹、风湿疼痛等症。本研究采用先进的样品前处理技术,以多维色谱-组合质谱法作为研究技术和手段,在实现羌活现代化提取、分离和鉴别以及制备技术平台建立的基础上,对羌活体外质量标准的确立和极性化合物组活性筛选进行了深入的探讨。本研究首先采用单因素法对使用加速溶剂萃取法（以下简称ASE） 对羌活中主要化学成分的提取进行了优化,利用超高效液相色谱-组合质谱技术鉴定出羌活中的多种化学成分。对羌活的非药用部位茎、叶进行了生药学鉴定、化学成分组和代谢组进行了定性定量分析,为羌活茎叶的使用奠定坚实的基础。对不同炮制方法的羌活提取物、茎、叶的抗氧化活性进行了研究,筛选出具有活性的羌活有效部位,为进一步开发奠定了基础。羌活作为中国传统中药材,其药理作用广泛,药用价值巨大。近年来需求量大量增加,市场上的商品药材质量参差不齐,给羌活药材的临床应用造成了极大的困扰,其主要原因是羌活的药效物质基础不明,羌活巨大的价值没有得到充分发掘,已有标准难以控制羌活药材的质量,因此,对羌活药材进行化合物组及代谢物组的研究,将有利于发现羌活药材中的有效成分以及入血成分,从而从体外控制羌活的质量,为羌活药材的现代化、国际化奠定坚实的基础。羌活药效成分的确定,为羌活进一步的体外定量指纹谱、体内代谢指纹谱以及多组分药代动力学的研究奠定基石。确定其严格的质量标准能够有效保证羌活用药的安全、有效和质量可控性;全面的体内代谢指纹谱的建立,揭示出羌活作用的药效物质基础以及体内代谢特征,为其作用机制的推断提供参考;多组分药代动力学的研究表明了羌活在体内的吸收、转运、分布与代谢过程,为临床给药方案提供理论依据。本研究建立的羌活药材主要活性成分的高效提取鉴定、快速分离制备、及其色谱-组合质谱联用技术进行全面质量控制、多方位体内代谢过程探索和药代动力学研究,对阐明羌活的药效物质基础以及作用机制具有重要的科学意义。 本项目任务书规定的主要研究内容包括以下3个方面：1. 羌活药材的收集与化合物成分鉴定：（1）收集不同基源、不同产地和不同商品规格的样品;（2）选择对提取效率有大幅度提高的现代化加速溶剂萃取技术,快速高效的提取羌活及宽叶羌活中的主要成分。找到对质量有重要影响的共有峰和区分峰,作为定量指标;（3）对多批样品中多个定量指标进行了多组分含量测定,全面评价羌活及宽叶羌活样品的质量。2. 多种制备技术结合大鼠镇痛实验 （1）采用大孔吸附树脂分离切割得到羌活不同极性化合物组; （2）运用大鼠福尔马林致痛实验,筛选出活性镇痛化合物组; （3）利用分析型高速逆流色谱技术快速大量制备羌活活性单体成分。3.羌活药材多组分质量控制 （1）对多批不同产地的羌活及宽叶羌活样品进行中药指纹图谱分析;（2）采用相似度分析、聚类分析和判别分析,区分不同品质的样品,同时找到对质量有重要影响的共有峰和区分峰,作为定量指标;（3）对多批样品中多个定量指标进行了多组分含量测定,全面评价羌活及 宽叶羌活样品的质量。 本项目关键技术主要包括以下两个方面：（1）加速溶剂萃取技术,取适量不同产地羌活及宽叶羌活药材,分别粉碎、过50目筛,室温下储存,备用。分别准确称取干燥粉末,置于ASE不锈钢萃取池中,底端放置玻璃纤维滤片,防止滤渣进入收集瓶中。两端用不锈钢螺旋帽旋紧,置于相对应位置。分别用水或不同浓度的乙醇溶液,按实验设计的条件,在不同提取温度,萃取时间,循环次数下提取羌活粉末。设置用 60%池体积的提取溶剂冲洗萃取池,并N2吹扫一定时间,用收集瓶收集提取液。（2）指纹图谱结合模式识别法进行多组分质量控制,采用目前认为控制中药质量最有效的手段——中药指纹图谱对不同批次羌活进行分析,多点校正后,进行色谱峰的自动匹配,根据实际情况,UHPLC法测定不同批次羌活样品中定量指标成分的含量,计算目标成分日内、日间精密度,重现性,稳定性,加样回收率以及峰面积的 RSD,评价各批样品的质量。