[01255291]水产养殖主要病害的特征病原快速检测技术研究及其应用

随着海水养殖集约化程度的不断提高，养殖动物疾病暴发日趋频繁和严重。

病害以生物源性疾病为主，其中又以细菌性疾病造成的损失最大，其中弧菌属，链球菌属、李斯特菌属、以及诺卡氏菌属等严重威胁着水生动物以及人体健康。

因此利用有效方法和手段实现水产养殖过程中致病菌的早期检测、养殖环境的实时监控和预警等，对于降低生物性疾病爆发频率，提高养殖效益、促进养殖业健康发展等具有重要意义。

本项目研发了针对溶藻弧菌（Vibrio. alginolyticus）、坎氏弧菌（V. campbellii）、哈维弧菌（V. harveyi）、需钠弧菌（V. natriegens）、副溶血弧菌（V. parahaemolyticus）和轮虫弧菌（V. rotiferianus）、鳗弧菌（V. anguillarum）、霍乱弧菌（V. cholerae ）、海豚链球菌（Streptococcus iniae）和美人鱼发光杆菌杀鱼亚种（Photobacterium. damselae subsp. Piscicida）等10个种的微阵列检测芯片，可在4小时内完成菌株鉴定。

然后又成功研发了可同时检测针对溶藻弧菌、哈维弧菌、副溶血弧菌、轮虫弧菌、鳗弧菌、创伤弧菌、河弧菌、海豚链球菌、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）、铜绿假单胞菌（P. aeruginosa），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），鰤鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae），单胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）等 13 种重要海水养殖病原菌的等温扩增芯片体系，检测灵敏度为 6.96E + 01-1.20E + 03 拷贝/反应，标准品间的检测准确度 ＞ 95%，无交叉反应，检测仅需 50 min。

该技术首次将等温扩增技术和微流控技术结合起来应用到水产养殖病害检测中，检测灵敏度和准确度和检测的都达到国际先进水平，检测时间也达到同类产品国际先进水平。

该技术适用于各种水产动物及相关养殖环境中的相关病原菌的快速鉴定。

该技术试用了100多份水产动物和环境样品，该芯片体系的临床灵敏度为 92.7%，临床特异性为 86.7%（相对于传统的微生物学检测方法）。