[01227155]中药星裂硬皮马勃菌种选育、发酵工艺及抗炎镇痛作用研究

1、课题来源与背景 （1）成果名称：中药星裂硬皮马勃菌种选育、发酵工艺及抗炎镇痛作用研究。 课题来源于吉林省教育厅“十二五“科学技术研究项目,吉教科合字[2013]第85号。 我国中药马勃临床用途广泛,从皮肤外用药发展到内服治疗呼吸系统和消化系统炎症、出血等症。加之近年来人们发现马勃制剂在抗菌和抗癌方面的特殊作用,已经越来越受到医药工作者的广泛关注,人工栽培和利用深层培养技术研究马勃的发酵条件及其发酵产物的工作已有开展,开发利用的潜力巨大,一定会成为中国最有开发前景的药用真菌之一。由于对马勃的质量控制研究滞后,特别是马勃的药效物质基础及生物学活性研究的广度与深度尚不深入,具体药理作用机制尚不明确。因此,积极开展真菌马勃的基础研究工作,搞清我国马勃资源,建立可控的质量标准,对其化对其化学、药理进行深入研究,为其临床利用和开发提供科学的支撑显得尤为重要。如果能够利用生物发酵的手段解决资源短缺问题,将具有巨大的潜力市场。因此通过教育厅立项对此项目进行了研究。 （2）研究起始日期：2013.01-2014.12 课题研究期间,严格按照项目合同书的规定执行,完成了各项技术指标,发表国家级中文核心期刊论文2篇,培养硕士研究生6人。 2、研究目的与意义 星裂硬皮马勃（Scleroderma polyrhizum Pers．）是药用真菌马勃的一种。马勃为较常用真菌类中药,别名马疕、灰菰、牛屎菰、马屁包、地烟、药苞等。始载于《名医别录》,具有清肺、利咽、解毒、止血之功效。《中国药典》各版收载的马勃药材仅有3个来源作为正品入药：即脱皮马勃属Lasiosphaera脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich.、秃马勃属 Calvatia紫色马勃（又名紫色秃马勃）Calvatia lilacina （Mont.ex BerK.）Lloyd．和大马勃（又名大秃马勃）Calvatia gigantea （Batsh ex Pers.）Lloyd． 通过我们对马勃资源调查发现,目前全国除上述种类外还有十几种大型马勃作为药用。马勃在实际应用中品种比较混乱,其主要作用为局部止血,解毒,清肺,兼治咽喉痛、失音,并且有抗肿瘤,抗病毒,免疫调节等药效。特别是在治疗外伤出血、溃疡（冻疮、烧伤、褥疮）方面有奇效,在战地创伤救治,突发灾难如地震创伤救治方面有极其广阔的应用前景。但药材资源奇缺,想买到吨级药材很难,这给大规模的生产和应用带来不便。马勃由于其特有的生物学特性,很难及时采摘到大量的药材,自然资源有限,不能满足医疗需求,对马勃研究的报道也较少,因此为了适应社会需求,走可持续发展的道路,我们有必要对菌种进行分离、选育,筛选出符合生产要求的菌种,走工业化液体培养的路线保证临床药用资源。为保证其安全性、有效性和资源的可利用性,对其菌种进行选育,进而进行人工栽培或液体发酵获得药用资源具有很高的社会意义和经济意义。 3、主要论点与论据 论点：由于马勃是大型的药用真菌,真菌的特点是可以通过其营养体-菌丝进行固体或液体发酵生产,因此,从野生子实体或孢子分离得到纯菌种,通过选育获得高产菌株,进而利用工业化液体发酵技术生产马勃菌丝体和菌丝体的次级代谢物,代替野生马勃的药用。 论据：通过孢子分离法,经过连续数代的培养选育,得到了纯的优良菌种,选育出优良的菌种Spo-2菌株,已于2013年4月1日,在中国科学院微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏,保藏号：CGMCC No.7406。;最佳培养条件：蔗糖2%、尿素2%、CaO 0.05%、pH7、温度为24℃。液体种子发酵条件：蔗糖3%、蛋白胨2%、KH2SO4+MgSO4 0.1%、pH自然、接种量10%、转速160r/min、装液量为100ml/500ml。发酵罐工艺：蔗糖3%、麦麸汁2%、KH2PO4 0.1%;接种量10%,装液量60%,转速：160r/min。发酵物多糖含量不低于3.00g/100mL;发酵菌丝麦角甾醇含量不少于0.20%;菌丝甘露醇含量不少于7.00%。通过小鼠耳肿胀、扭体试验,证明星裂硬皮马勃的发酵液具有抗炎镇痛作用。 4、创见与创新 首次获得星裂硬皮马勃菌种的高产菌株,并对其生物学进行了考察,制定菌种的质量标准;首次利用实验室发酵模拟工业生产,确定了其发酵工艺,为工业化大生产奠定基础;证明了星裂硬皮马勃液体发酵物具有抗炎、镇痛活性。 5、社会经济效益 由于中药马勃临床用途广泛,野生资源短缺,利用生物发酵的手段解决资源短缺问题,既能够满足临床药用需求,又可以保护野生马勃生态资源,因此具有极大的社会经济效益。