[01148873]快速检测耐药性铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析试纸条的研制

分离纯化铜绿假单胞菌,筛选出AmpC酶阳性菌株,构建铜绿假单胞菌重组外膜蛋白OprH原核表达载体,用铜绿假单胞菌外膜蛋白OprH免疫BalB/C小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用胶体金标记纯化的抗OprH的单克隆抗体;提取AmpC酶免疫BalB/C小鼠获得抗AmpC酶的多克隆抗体,用胶体金进行标记,它和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕获抗体包被于硝酸纤维素膜上,组装成双抗体夹心法胶体金免疫层析快速检测试纸条。 本研究建立的胶体金免疫层析试纸条可以快速的鉴定各种体液标本中（血液除外）的细菌是否为铜绿假单胞菌,并能进一步明确该菌是否为产AmpC酶的高度耐药菌株,标本处理过程简单,可在15分钟内肉眼直观判断结果,快速且特异性高,从而为临床医生尽早合理应用抗感染药物提供了可靠的依据。 此项技术检测一次即达到了二次筛选的目的,节省了检测时间,大大减少了临床经验用药造成的医疗资源的浪费,节约医疗费用。 此项检测技术成本低廉,检测费用低,可大幅度为患者减轻经济负担。 此项检测技术无需对致病菌进行增殖,大大减少试验用细菌数量,对减少环境污染具有非同小可的意义。