[01143886]遗传改良病毒杀虫剂的生产技术研究

1.重组病毒的构建和筛选 在荷兰农业大学研究人员的协助下,成功构建了一株缺失egt基因和在p10基因启动子下游插入绿色荧光蛋白标记基因的重组甜菜夜蛾核多角体病毒,我们对已构建的一株缺失egt基因的SeNPV重组病毒进行了DNA提取和酶切分析,发现重组病毒与野生型病毒的DNA酶切图谱不同,说明重组病毒DNA有缺失。PCR结果发现,在重组病毒中扩增出了gfp基因。与预想结果相同。证明我们构建的重组病毒,经过传代,未改变其结构和组成。实验室杀虫实验证明,该重组病毒的杀虫速度比野生型甜菜夜蛾核多角体病毒提高30%左右,同时使受感染幼虫取食量减少37%。目前该重组病毒已完成田间小区释放试验。 2.菜夜蛾种质保持 （1）甜菜夜蛾人工饲料配方优化：我们与中山大学生物防治国家重点实验室合作在已选出的甜菜夜蛾人工饲料配方基础上,通过进一步添加5种价格低廉的微量营养成分和减少50%干酪素,成功筛选了另一饲养效果更佳的甜菜夜蛾人工饲料配方。该饲料配方不仅保持了原饲料配方饲养效率高、产卵量多、幼虫发育历期短的特点,而且克服了原饲料配方饲养甜菜夜蛾7代后卵孵化率下降,14代后卵几乎不孵化的缺点。目前,实验室昆虫饲养室和广州市中达生物工程有限公司已利用该饲料配方连续饲养甜菜夜蛾3年多,饲养代数50余代,有效延缓了甜菜夜蛾室内种群的衰退,为工厂化稳定饲养甜菜夜蛾打下了重要的基础。另外,该配方不仅可用于饲养甜菜夜蛾广州品系,而且也能用于饲养甜菜夜蛾荷兰品系和日本品系,具有广泛的应用价值。 （2）甜菜夜蛾卵超低温冷冻保存：在液氮（196℃）中成功保存了甜菜夜蛾授精卵的基础上。经进一步研究,已将冻存卵的孵化率从原来的1.6%提高到12.2 %。此项研究将为今后有效保持甜菜夜蛾良好种质提供新途径。