[01017878]安全高效猪支原体肺炎活疫苗的创制及应用

猪支原体肺炎是世界范围内重要的猪传染病,感染率70%～90%，发病率40%以上，仅中国每年造成的直接经济损失超过100亿元。国内外防控该病主要依靠抗生素和灭活疫苗，但抗生素易导致病原菌产生耐药性，灭活疫苗存在免疫期短、保护率低等缺陷。活疫苗作为防控猪支原体肺炎的理想手段，具有免疫保护快、效力高等优势，但活疫苗创制存在着超强毒株的筛选与分离培养、强毒致弱过程中的免疫原性不丢失、致弱株的无细胞培养工艺等世界性难题。该项目在国家科技攻关计划等项目资助下，历经30多年持续攻关，成功创制了具有国际领先水平的猪支原体肺炎活疫苗，实现了自主知识产权产品的产业化应用，推动了猪支原体肺炎疫苗研发与应用的技术进步。主要发明创造如下：1.发明了国际上首个适应体外无细胞培养的猪肺炎支原体克隆致弱株。创制了KM2无细胞培养基，创立了“病肺块浸泡法”分离培养技术，解决了猪肺炎支原体体外培养和高效分离的技术难题。从全国12个省市分离鉴定的55株猪肺炎支原体野毒中，筛选、鉴定出具有超强毒力的安宁系168强毒株。独创了“KM2无细胞培养-本种动物回归交替传代”的致弱技术，历经14年，连续继代致弱强毒株至F322代以上，经多次固相克隆纯化，实现了致弱株的无细胞培养，彻底摆脱了传统致弱方法依赖异种动物传代的困扰，攻克了外源微生物及制剂污染的重大难关，最终育成国际上首个免疫原性高、适应无细胞培养的猪肺炎支原体克隆致弱株，为活疫苗创制和产业化生产奠定了关键性基础。2.创制了免疫效力居国际领先水平的褚支原体肺炎活疫苗。优选出高效的肺内免疫途径，显著诱导猪呼吸道免疫保护，疫苗保护率达80%～96%,免疫期达9个月。创建了高效低成本的疫苗生产工艺新技术，建立了人工发病模型和早期免疫程序，制订了疫苗制造与检验规程及质量标准，创制出安全高效猪支原体肺炎活疫苗，实现了规模化生产，产品应用效价高、应激低，保护率和免疫期等关键技术指标达到国际领先水平。3.创建了褚支原体肺炎活疫苗应用配套技术体系。建立了猪肺炎支原体抗原与抗体快速敏感检测技术，制订了猪支原体肺炎诊断与防控技术标准。根据中国生猪养殖模式和活疫苗产品的免疫特点，创建了以猪支原体肺炎活疫苗免疫为核心，集成猪支原体肺炎的早期检测、动态监测、环境控制、饲养管理、生物安全为一体的应用配套技术体系。活疫苗上市并广泛应用，改变了中国猪支原体肺炎疫苗防控完全依赖进口灭活疫苗的局面。该项目创制的活疫苗与进口灭活疫苗相比，保护率提高20%，免疫期延长3-5个月，疫苗生产成本降低80%。在全国28个省市3544.02万头猪上应用，新增社会经济效益60.81亿元。疫苗使用权与六家企业达成二次转让协议，并已与其中1家签订合同，转让经费1000万元。发表论文139篇，出版专著1部，获国家授权发明专利4项，国家二类新兽药注册证书1件，制定地方标准3项，获神农中华农业科技一等奖、大北农科技成果奖。